En esta fase realizamos la detección del híbrido, la cual depende del tipo de marcaje que lleve la sonda.
-Marcado radioactivo: Al finalizar el último lavado de poshibridación, dejamos secar la membrana y la revelamos mediante exposición autoradiográfica. Esta exposición la realizamos colocando una placa radiográfica encima y manteniendo el conjunto en oscuridad durante horas o días.
En nuestro caso, realizamos un sexto paso en el protocolo, y por ello no dejamos secar la membrana. La envolvemos en un plástico para mantener la humedad y evitar el contacto directo con la placa fotográfica.
-Marcado con haptenos: Al finalizar el último lavado de poshibridación, lo revelamos con un método de detección cromogénico (que se basa en una reacción inmunohistoquímica). Por ejemplo:
La dioxigenina se une a un anticuerpo primario que a la vez se une a un anticuerpo secundario que lleva una enzima que hace que se catalice una reacción inmunohistoquímica. Esta reacción hace que se deposite en el lugar de la hibridación un producto coloreado soluble.
Este método impide una rehibridación, por lo que no es utilizada a menudo.
Sin embargo, la técnica más importante y utilizada es la del marcado radioactivo.
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