Aplicaciones del Dot Blot

La técnica de hibridación conocida como Dot Blot tiene varias aplicaciones a la biología molecular. Lo más genérico es utilizarla como técnica de rastreo, pero hay otras aplicaciones específicas.

Dot Blot como técnica de rastreo

El Dot Blot se puede utilizar como técnica de rastreo para detectar varias secuencias de interés simultáneamente. Algunas de sus aplicaciones son:

-Estudios de expresión génica. En los cuales se detecta ARNm concretos en poblaciones celulares en situación basal y tras estimularlo, en células tumores...

-Detección de secuencias extrañas en muestras biológicas. Como bacterias, virus, parásitos...

-Control de calidad de PCR. en el que se puede comprobar la especificidad, así como aumentar la sensibilidad de la PCR (permitiendo la confirmación de casos dudosos). 

-Control de calidad del marcaje sondas. En el que se utiliza como muestra secuencias diana control. También permite calcular la sensibilidad el límite de detección de las sondas marcadas.

-La determinación del sexo en especies sin diferenciaciones fenotípicas. 

ASO Dot Blot

Se usa para detectar mutaciones, tanto en homocigosis como heterocigosis.  Requiere una PCR previa. 

Al producto que se obtiene de la PCR (la cual amplifica la región del gen que presenta las variaciones alélicas) se le hibrida con oligonucleótidos y se utiliza como muestra para el Dot Blot. 

Dot Blot inverso

Se asemeja a un ASO Dot blot pero al revés. 

Aquí, lo que se coloca en la membrana son los oligonucleótidos específicos de cada alelo (mutado y no mutado). Lo que se marca es el producto de la PCR, que es el gen que nos interesa (mediante el uso de cebadores marcados). Para cada caso se emplea una membrana que se híbrida con el producto marcado de la PCR. 

Hibridación de colonias

Se utiliza para detectar bacterias que contienen una secuencia génica concreta. A partir de una placa de cultivo, con colonias bacterianas aisladas, se recorta una membrana para el Dot Blot. A continuación, se lisan las bacterias y se desnaturaliza el ADN, colocando la membrana sobre un papel para que se seque. Se aplica calor y se produce a realizar un Dot Blot tradicional. 

Hibridación de placas virales

Tipo de dot Blot utilizado principalmente para detectar virus que portan la secuencia diana. Es especialmente relevante en tecnologia de ADN recombinante para localizar los fagos con la secuencia clonada.